Qual è il metodo ELISA?

Il metodo ELISA è un test che viene utilizzato in immunologia e altri campi scientifici per rilevare anticorpi e antigeni. ELISA significa saggio di immunoassorbimento enzimatico, che si riferisce al fatto che gli anticorpi accoppiati agli enzimi vengono utilizzati per determinare i risultati della prova. Il metodo ELISA è usato in medicina per rilevare anticorpi di malattie come misura diagnostica, ed è una tecnica comune in ricerca immunologica e biochimica.

Il test ELISA è stato sviluppato negli anni 1960 e 1970 in sostituzione di test immunologici che prevedeva l'uso di anticorpi e antigeni radioattivi. I rischi di usare materiali radioattivi reso il processo di test ingombrante non sicuri, e l'avvento del metodo ELISA risolti entrambi questi problemi. Invece di utilizzare materiali radioattivi per determinare i risultati di un test, l'ELISA utilizza enzimi che reagiscono con gli anticorpi per formare prodotti colorati. Lo sviluppo del colore in un test ELISA indica un risultato positivo.

Ci sono diversi tipi di test ELISA. Il metodo ELISA più comunemente utilizzato è chiamato l'ELISA indiretto, questo è un test anticorpo utilizzato per determinare se un certo tipo di anticorpo è presente in un campione, e in quale concentrazione. In medicina diagnostica, questa prova viene utilizzato per rilevare la presenza di anticorpi di malattie infettive come l'HIV, epatite, e altri. La presenza di anticorpi contro queste malattie indica che l'individuo da testare è stato esposto agli agenti infettivi. In genere, il campione utilizzato è di sangue un patientâ € s.

In questa prova, una specifica proteina antigene è utilizzato per rivestire una piastra di microtitolazione. Questa piccola piastra in plastica contiene 96 pozzetti minuscole, e un singolo test ELISA può essere eseguito in ciascun pozzetto. L'antigene utilizzato per una data prova dipende dal tipo di anticorpo test sta tentando di rilevare. Ad esempio, se l'ELISA viene usato per un test HIV, l'antigene usato dovrebbe essere specifico per questo virus.

Con il procedere della prova, piccole quantità di campione sconosciuto vengono aggiunti a ciascun pozzetto della piastra di microtitolazione, e la piastrina viene incubata per dare tempo anticorpi nel campione di legarsi all'antigene. Successivamente, un anticorpo di rilevazione secondario viene aggiunto a ciascun pozzetto della piastra. Se il campione contiene qualsiasi tipo di anticorpo che è stata verificata, si legherà all'anticorpo secondario rilevamento durante il successivo periodo di incubazione.

La chiave per il metodo ELISA è che l'anticorpo secondario marcato con un particolare tipo di enzima. L'enzima usato è in grado di cambiare il colore del campione quando reagisce con il suo substrato. Pertanto, se un campione contiene alcun dell'anticorpo essere testato per, aggiungendo il substrato ad un pozzo causerà a cambiare colore, dovuto alla presenza di anticorpo secondario e il suo enzima associato.

Ci sono altre varianti del metodo ELISA, compreso un test chiamato sandwich ELISA. Questo è utilizzato per rilevare antigeni in un campione, anziché di anticorpi. In questo test, la micropiastra è rivestita con un campione standard di anticorpo. Successivamente, viene aggiunto il campione di prova dell'antigene, seguita dall'aggiunta di rilevazione dell'anticorpo secondario e il suo enzima associato. Come con l'ELISA indiretto, la formazione di un prodotto colorato indica un risultato positivo.

  • I campioni di sangue areanalyzed identificare specifiche proteine ​​e loro concentrazioni attraverso il metodo ELISA.