Che cosa è RNA Gel elettroforesi?

In biochimica, elettroforesi su gel RNA è un metodo comune utilizzato per analizzare la molecola biologica chiamato acido ribonucleico (RNA). Elettroforesi su gel separa molecole di dimensioni e la carica così come sono "setacciati" attraverso un foglio di fatto da una sostanza chimica gelatinosa. Questo processo è più spesso impiegato in laboratori per analizzare frammenti di acido desossiribonucleico (DNA) o RNA, molecole che contengono informazioni genetiche di un organismo. Elettroforesi su gel RNA differisce leggermente da elettroforesi su gel DNA in procedura, dal momento che le molecole di RNA, a differenza di DNA, sono catene a singolo filamento che tendono a piegare in strutture. Questo rende la separazione dal formato più difficile per frammenti di RNA.

Il primo passo per gel elettroforesi RNA è l'isolamento di molecole di RNA dalle cellule biologiche campione. Il tessuto campione viene sciolto in una miscela specifica di sostanze chimiche e purificato per rimuovere l'enzima RNasi, proteine ​​e DNA. È particolarmente importante che il campione non sia contaminato con RNasi in qualsiasi punto del processo, in quanto RNase catalizza la degradazione di molecole di RNA, provocandone la rottura a parte. Dopo che il campione è purificato, è raffreddato e un'altra sostanza chimica viene aggiunto per rendere il precipitato di RNA, o far cadere come un solido dalla soluzione. Il campione viene poi messo in una centrifuga, che lo ruota ad alta velocità e isola il solido precipitato sul fondo della provetta.

In una procedura di DNA o RNA gel elettroforesi, le molecole biologiche purificati vengono aggiunti ai pozzetti in una estremità di un foglio di gel piatta. Una corrente elettrica viene quindi eseguito attraverso il gel. Poiché DNA e RNA sono caricate negativamente, sono attratti l'elettrodo positivo in fondo del gel, e migrano attraverso i pori del gel a tal fine. I pori del gel sono di dimensione fissa, così piccoli frammenti di DNA o RNA migrano più rapidamente rispetto frammenti più grandi, che hanno più problemi durante la navigazione attraverso la matrice porosa.

Dopo il gel è stato eseguito per un periodo di tempo specificato, la corrente elettrica viene spento ei risultati sono esaminati. Le molecole di DNA o RNA possono essere colorati e resi visibili a questo punto. Ogni frammento apparirà come una banda in un punto diverso nel gel, a seconda di quanto è stato in grado di migrare viste le sue dimensioni. La separazione di frammenti per dimensione può essere utile in campioni di confronto, come in medicina legale, per determinare se c'è una corrispondenza - campioni identici avranno modelli banda identici.

In elettroforesi su gel RNA, è necessaria l'ulteriore fase di denaturazione prima del gel può essere eseguito. In condizioni normali, le molecole di RNA si aggregano o piegare in strutture secondarie, influenzando la mobilità dei frammenti di RNA attraverso il gel. Per impedire che ciò accada, il campione deve essere RNA denaturato mediante aggiunta di una sostanza chimica, come la formaldeide, il campione e il gel.

  • Labs utilizzano elettroforesi su gel di analizzare frammenti di RNA.